Publicación: Uso de biomarcadores en el estudio del posible efecto genotóxico de Malathion® en eritrocitos de Boana xerophylla (Duméril & Bibron, 1841)
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Resumen en español
El uso de plaguicidas es uno de los mayores desafíos debido a que sólo una pequeña parte de los agroquímicos llega a la plaga lo que puede afectar posiblemente el suelo, agua y biota. De esta manera, la prueba de micronúcleos ha sido extensamente utilizada para la detección de daño por la interacción de agentes químicos. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue determinar la frecuencia de aparición de micronúcleos y presencia de anormalidades nucleares en eritrocitos de individuos adultos de Boana xerophylla expuestos al Malathion 57% EC. Para ello, se sometieron ranas adultas a la exposición de tres tratamientos que consistían en la aplicación cada 24 horas por medio de aspersores, a partir de la dosis comercial para gramíneas (2 L/Ha), el grupo control negativo (agua) y control positivo (ciclofosfamida) (cinco organismos en cada uno de ellos), durante 96 horas. Se realizaron extracciones de sangre (punción en vena ciática), antes de iniciar y al finalizar el experimento, las ranas fueron sacrificadas por sobredosis de anestesia (0.5 ml de una solución inyectable de roxicaína 2%) y se realizó punción cardíaca por medio de jeringas de insulina (1 ml). El extendido de sangre y su respectiva tinción se realizó con colorante May-Grünwald-Giemsa. Cada extendido se observó en un microscopio óptico LEICADM500 con cámara integrada LEICA ICC50 W en el Laboratorio de Biología de la Universidad de los Llanos. Se utilizó la prueba de proporciones binomiales con el software Biostat 5.0 para comparar la frecuencia de aparición de micronúcleos (MN) y anormalidades nucleares (AN) entre los grupos control y tratamientos. Se evidenciaron eritrocitos de la especie B. xerophylla, los cuales se destacaron por una estructura del núcleo oval con una clara delimitación y abundante citoplasma. Se observaron AN como células binucleadas, picnóticas, arriñonadas, micronúcleos y cariorrexis. La frecuencia de AN y MN fue mayor en el tratamiento C, que consistía en 3 aplicaciones de Malathion EC 57% cada 24 horas, seguido del control positivo, tratamiento B (dos aplicaciones), tratamiento A (una aplicación) y el control negativo o blanco. El análisis de proporciones binomiales (p<0.05) evidenció diferencias significativas entre los tratamientos A, B, 9 C y Control positivo (CP) con respecto al blanco para las 96 horas de exposición tanto para AN y MN. Se realizó seguimiento comportamental a todas las ranas en los diferentes tratamientos y se evidenciaron cambios en el comportamiento a partir de estímulos de presión física. Se observaron, miembros anteriores comprimidos contra el cuerpo, miembros posteriores y anteriores estirados con el cuerpo curvo. En este trabajo fue evidente elaumento en la frecuencia de aparición de AN y MN a medida que aumentaba la frecuencia de aplicación del MALATHION 57% EC. Dentro de las AN, la mayor frecuencia fue las células picnóticas relacionada con muerte celular, y la cariorexis asociada únicamente al tratamiento C. La exposición de ranas adultas de B. xerophylla a Malathion genera alteraciones en el comportamiento en individuos adultos de la especie asociado al efecto negativo sobre la enzima acetilcolinesterasa como posible candidata del cambio comportamental.
Resumen en inglés
The use of pesticides is one of the biggest challenges because only a small part of the agrochemicals reach the plague which can affect the soil, water, and biota. In this way, the micronucleus test has been widely used for the detection of damage by the interaction of chemical agents. Therefore, the objective of this work was to determine the frequency of occurrence of micronuclei and the presence of nuclear abnormalities in erythrocytes of adult Boana xerophylla individuals exposed to Malathion 57% EC. For this, adult frogs were subjected to the exposure of 3 treatments that consisted of the application every 24 hours by means of sprinklers, from the commercial dose for grasses (2 L / Ha), the negative control group (water) and control positive (cyclophosphamide) (five organisms in each of them), for 96 hours. Blood extractions (puncture in the sciatic vein) were performed, before starting and at the end of the experiment, the frogs were sacrificed by anesthetic overdose (0.5 ml of an injectable solution of 2% roxicaine) and cardiac puncture was performed using syringes of insulin (1 ml). The extended blood and its respective staining were performed with May-Grünwald-Giemsa dye. Each extension was observed in a LEICA DM500 optical microscope with an integrated LEICA ICC50 W camera in the Biology Laboratory of the University of Los Llanos. The binomial proportions test was used with the Biostat 5.0 software to compare the frequency of occurrence of micronuclei (MN) and nuclear anomarlities (AN) between the control and treatment groups. Erythrocytes of the species B. xerophylla were evident, which were highlighted by an oval nucleus structure with a clear delimitation and abundant cytoplasm. AN was observed as binucleated, pycnotic, cornered, micronucleus and karyorrhexis cells. The frequency of AN and MN was higher in treatment C, which consisted of 3 applications of Malathion EC 57% every 24 hours, followed by positive control, treatment B (two applications), treatment A(one applications), and negative or white control. The analysis of binomial proportions (p <0.05) showed significant differences between treatments A, B, C and Positive Control (CP) concerning the target for 96 hours of exposure for both AN and MN. Behavioral follow-up was performed on all frogs in the 11 different treatments and behavioral changes were evidenced from physical pressure stimuli. Anterior members compressed against the body, posterior and anterior members stretched with the curved body were observed. In this work, the increase in the frequency of occurrence of AN and MN was evident as the frequency of application of MALATHION 57% EC increased. Among the AN, the most frequent was the pycnotic cells related to cell death, and the karyorrhexis associated only with the C treatment. Exposure of adult frogs from B. xerophylla to Malathion generates behavioral alterations in adult individuals of the species associated with a negative effect on the enzyme acetylcholinesterase as a possible candidate for behavioral change.